一、DNA的粗提取与鉴定
1.实验原理
(1)十二烷基硫酸钠和碱可以使细胞膜破裂,蛋白质变性,使蛋白质和DNA分离开来。
(2)DNA能溶于氯化钠溶液中,但不溶于酒精,加入酒精可以使DNA从溶液中析出。
(3)DNA+二苯胺蓝色(DNA鉴定)。
2.实验流程
(1)研碎细胞(细胞释放DNA):将30 g香蕉或菜花切碎,放入研钵中,加入2 g NaCl,研磨直至成半流体状。
(2)蛋白质与DNA分离:向研钵中加入10 mL蒸馏水或凉开水搅拌,然后加入10 mL洗涤剂,轻轻搅拌。
(3)过滤、析出DNA:将混合液用两层纱布过滤,向滤液中加入预冷的10 mL乙醇溶液,静置,即可产生絮状的DNA。
(4)获取DNA:取两支试管,分别加入5 mL生理盐水,将DNA挑至其中一支试管中,轻轻搅拌使其溶解。
(5)鉴定DNA:向两支试管中各加入4 mL二苯胺,混匀后,放入沸水中加热5 min。
(6)观察现象:待试管冷却后,观察并比较两支试管中溶液颜色的变化。