一、目的基因的获取(阅读教材P8~P11)
.目的基因:主要是指编码蛋白质的基因,也可以是一些具有调控作用的因子。
.目的基因的获取方法
(1)从基因文库中获取
①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。
②种类
③提取依据:基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性。
(2)利用PCR技术扩增目的基因
①PCR的含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
②目的:短时间内大量扩增目的基因。
③原理:DNA双链复制。
④过程
第一步:加热至90~95 ℃,DNA解链;
第二步:冷却至55~60 ℃,引物结合到互补DNA链;
第三步:加热至70~75 ℃,热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。
如此重复循环多次。
⑤特点:指数形式扩增。
(3)人工合成
如果目的基因较小,核苷酸序列又已知,可通过DNA合成仪用化学方法人工合成。